
ViaScript™ LgBiT mRNA Delivery System
HiBiT 标签仅11个氨基酸,非常适合在活细胞水平进行内源性蛋白表达检测,如活细胞水平检测 靶向蛋白降解(TPD)。在将HiBiT标签与目标蛋白融合后(例如通过 CRISPR 介导的基因编辑),需同时表达 LgBiT 蛋白,LgBiT 蛋白以高亲和力与 HiBiT 结合,构成 NanoBiT® 萤光素酶。相比传统的质粒转染,Promega 发布了新的mRNA递送系统:
ViaScript™ LgBiT mRNA Delivery System 能够更均匀、高效地转染 LgBiT mRNA,更方便快捷地从单个孔中的活细胞中动态地量化HiBiT 标记的蛋白质。
ViaScript™ mRNA Transfection Reagent 是一种新型的非脂质体制剂,旨在以最小的毒性将 mRNA 高效转染到多种细胞系中,为转染细胞中的蛋白表达水平提供了更多的控制,递送系统中已包含mRNA转染试剂和 LgBiT mRNA。
产品特点
HiBiT活细胞动力学检测的优势:
展开剩余83% 方便观察单时间点检测可能遗漏的效应(如钩状效应); 通过连续取样可准确测定关键化合物特性(如蛋白降解/恢复速率),推动治疗药物的发现、筛选和优化; 通过同一孔板的连续取样提升实验重复性; 无需为每个时间点单独设置孔板,节省时间与试剂。ViaScript™ LgBiT mRNA 递送系统的【核心优势】:
能够在细胞群体中均匀且可调节的表达; 提高转染效率且不影响细胞活性; 可快速地产生稳定的信号(4小时即可产生信号,信号可稳定48小时以上)。检测步骤
ViaScript™ LgBiT mRNA 递送系统提供更快且更均匀的 LgBiT 表达,以获得更具代表性和精确的活细胞动力学 HiBiT 检测结果。
应用数据
01 实现均匀表达以获得一致和可靠的结果
上图. 一个22Rv1 AR-HiBiT克隆细胞系被用ViaScript™ LgBiT mRNA递送系统(左)或LgBiT表达载体(右)转染过夜。细胞被用1µM ARV-110 PROTAC(底部)处理6小时以诱导AR的降解,或者用溶剂对照(顶部)处理相同时间。在添加Nano-Glo®活细胞底物后使用GloMax® Galaxy细胞成像仪收集图像。
02 观察终点法检测模式可能错过的效应
上图.ViaScript™ LgBiT mRNA递送系统增强了对HiBiT CRISPR敲入细胞系中活细胞蛋白质水平的定量分析,提供了超越终点测定法的对模型和化合物更深入的理解。如上所述,动力学HiBiT靶向蛋白质降解测定法允许精确测量蛋白质降解速率、识别钩状效应(中间面板箭头所示)以及表征蛋白质恢复情况。
03 更快的获得结果
上图. 使用ViaScript™ LgBiT mRNA递送系统进行转染后,HiBiT信号比DNA质粒转染后更早达到峰值,使您能够更早开始实验并更快获取数据。
04 对细胞毒性更小
上图. ViaScript™ LgBiT mRNA递送系统提供高转染效率且细胞毒性极小,在各种细胞系中的表现优于DNA转染。通过将mRNA转染与HiBiT CRISPR敲入细胞系相结合,您可以在更精确模拟患者生物学的细胞环境中工作,从而获得更具代表性的结果,并推动研究的成功。
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普洛麦格公司(Promega Corporation)是为生命科学行业提供创新解决方案和技术支持的领先者。公司拥有超过4,000种产品的产品组合,服务于细胞生物学、DNA、RNA及蛋白质分析、药物研发、人类身份鉴定、分子诊断等生命科学领域。过去45年间,这些工具与技术的应用范围持续扩展,目前被全球科研机构、法医部门、制药企业、临床诊断实验室,以及兽医、农业和环境检测领域的专业人员使用。普洛麦格总部位于美国威斯康星州麦迪逊市,在16个国家设有分支机构,并通过50余家全球经销商提供服务。更多信息请访问:www.promega.com。
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